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酸性固绿染色液是利用酸性蛋白质与带有正电荷的酸性染料固绿结合进行染色，细胞中含量最为丰富的酸性蛋白主要存在于细胞质和核仁中，因此染色后细胞质和核仁大部分被染成绿色。由于酸性条件pH为2.2上下，在所有蛋白质等电点之下，因此全部蛋白质能被固绿染色，因此，酸性固绿染色液也被称作总蛋白固绿染色液。

不同的氨基酸带有不同化学性质的侧链基团，有的带有碱性侧链，有的带有酸性侧链，由此组成的蛋白质具有不同数目的碱性基团和酸性基团，这些基团会使蛋白质在不同的pH溶液中带有不同的净电荷，整个蛋白质分子带正电荷多，即为碱性蛋白(等电点偏向酸性)；整个蛋白质带负电荷多，即为酸性蛋白质(等电点偏向酸性)。利用蛋白质的两重性(酸碱性)及与酸性和碱性染料离子形成盐的能力，在pH=2.2（即所有蛋白质等电点之下），全部蛋白质能被固绿染色；在pH=8.1～8..2范围内，碱性蛋白质被固绿染色。

• 玻片、水浴锅、显微镜、pH计
  
• 70%乙醇、中性树胶、稀氢氧化钠或稀盐酸、5%三氯乙酸

• 血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色效果。
  
• 血细胞涂片染色要求新鲜全血或EDTA抗凝血。
  
• 染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染。
  
• pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁、无酸碱污染，以免影响染色效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 石蜡切片脱蜡至水。
  
• 浸入5%三氯乙酸中，90℃水浴15min，抽提除去核酸。
  
• 流水稍冲洗，70%乙醇洗涤三次，每次3min；滤纸吸去残留水分。
  
• 涂片浸入酸性固绿染色液染色20～30min。
  
• 流水冲洗5min，95%乙醇30s，无水乙醇两次、每次1min。
  
• 二甲苯或脱蜡透明液两次、1min，中性树胶封片。镜检。